熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用(二)
2012-06-19
3 在醫學中的應用
3.1 病原體測定
PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結果，這并不能作為診斷依據， 只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此，對模板準確定量顯得特別重要，應用熒光技術PCR儀就能夠快速、準確地得到結果。對于解決免疫學檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態，以及抗體檢測不能判定是現癥感染還是既往感染時，均可利用PCR進行確定。
一些研究資料表明，病原體感染后的發病時間，病情輕重及預后往往與病原體數量相關。如HIV感染后，潛伏期長短、臨床癥狀輕重與血液中病毒量顯著相關，甚至可根據HIV的量比較準確地預測發病時I 。在研究其他病毒感染性疾病是否有類似情況，病原體的致畸和致突變作用是否與病原體的量等有關問題時，也可利用FQ—PCR來闡明。另據研究發現，病毒的數量與某些藥物的療效相關。例如，干擾素對肝炎病毒高拷貝者不敏感，對低拷貝者敏感。因此利用FQ—PCR對某些病毒的定量分析可指導臨床用藥和制定治療方案。
3.2 腫瘤研究
盡管腫瘤發病的分子機制尚未完全闡明，但相關基因的遺傳學改變的積累是致癌性轉變的根本原因已得到普遍承認。癌基因的表達增加和突變在許多腫瘤早期和良性階段就可出現，FQ—PCR 不但能有效地檢測基因的突變，而且能準確測定表達量，據此進行腫瘤早期診斷、分型、分期和預后判斷。某些癌基因的遺傳學變化的檢測幾乎達到確診腫瘤的程度。例如，CD 基因的異常拼接表達，幾乎只有出現于某些泌系腫瘤。對于有慢性骨髓性白血病都可檢測到原癌基因易位導致的BCR/ABL融合基因形成，FQ—PCR技術不但可通過檢測BCR/ABL融合基因的表達而進行腫瘤診斷，還可檢測治療中和治療后
微量殘余惡性細胞存在的數量，以此作為治療效果
和估計復發的危險性的依據。
3.3 其他方面
在基因表達研究中， 由于FQ—CPR的應用，對mRNA的檢測顯得較以前常用的方法， 如Northem印跡、RT—PCR定量法要方便、快速、準確得多。在免疫組分析中，對免疫T細胞群體V—p組織進行分析是研究健康和疾病免疫應答反應的重要手段。利用FQ—PCR技術進行分析，克服了原來分析方法如流式細胞法、競爭性PCR技術等操作復雜，準確性低，污染嚴重的缺點。
4 結語
綜上所述，FQ—PCR作為一種核酸定量技術，在以前的PCR技術上得到進一步發展，大大降低了假陽性率，工作效率高，結果重現性好，且不必使用對人體有害的染色劑。FQ—PCR應用較多且較成熟主要是在病原體檢測方面，其優越性在此也得以充分體現。因此將其應用于臨床具有很大潛力。在腫瘤、遺傳病研究，尤其
是基因表達方面的研究，該技術應用還較少，在這方面加強研究應用，將會有廣闊的前景。將生物基因芯片技術與FQ—PCR技術結合，有助于PCR技術的進一步完善，推動該技術的發展、應用。
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